免疫顯色試劑（雙染Ⅰ型）說明書

?科研貨號：CSK1301

帶證貨號：SD8001

【產品名稱】

通用名稱：免疫顯色試劑（雙染Ⅰ型）

【包裝規格】

機載：100～150測試/盒；手工：100～200測試/盒、300～600測試/盒

【預期用途】

在免疫組化反應中與首要抗原抗體結合，通過染色，將靶點進行標記。

【檢測原理】

利用抗體抗原特異性結合原理，并通過氧化還原反應使標記二抗的酶顯色劑顯色，對靶點進行定性定位。首先，鼠抗人抗體與靶點抗原Ⅰ結合，辣根過氧化物酶標記的鼠源性二抗與鼠抗人抗體結合，通過DAB染色液顯色呈現棕色，對抗原Ⅰ進行定性定位。同時，兔抗人抗體與靶點抗原Ⅱ結合，堿性磷酸酶標記的兔源性二抗與兔抗人抗體結合，通過快紅染色液顯色呈現紅色，對抗原Ⅱ進行定性定位。蘇木素復染使組織結構更加清晰明了，利于病理醫師的結果判讀。

【主要組成成分】

表1試劑盒主要組成成分

【儲存條件及有效期】

2~8℃儲存，避免冰凍。有效期為12個月。 開封后，采取即拿即用原則，每次使用后，應立即放回2～8℃冷藏冰箱中。 運輸條件：運輸溫度不高于室溫，運輸時間不超過一周。 生產日期及使用期限詳見標簽。

【適用儀器】光學顯微鏡

【樣本要求】

組織樣本為新鮮活檢或外科樣本組織，10%中性緩沖福爾馬林固定，固定時間為8～24h，參照病理技術規范要求取材、脫水、石蠟包埋并制成蠟塊。
【檢驗方法】

提供手工試驗操作方法供參考，機載試劑檢驗方法參照機器預設程序

1.檢驗所需儀器、設備

移液器、免疫組化油筆、計時器、孵育盒、染色架、蓋玻片、光學顯微鏡、洗瓶。

2.溶液配制

DAB染色液：DAB底物和DAB緩沖液1：20比例配制所得。

快紅染色液：快紅顯色劑、活化劑和快紅緩沖液按照1: 1：30的比例配置所得，快紅顯色劑和活化劑混合反應3min之后，再加入快紅緩沖液。

清洗液：采用濃縮清洗液和純化水1：10比例配制所得。

3.試驗溫度條件：18~25℃

4.實驗步驟

4.1脫蠟和水化

石蠟切片置于新鮮的二甲苯中，浸泡2次，10min/次；

除去多余的液體后，置于無水乙醇中，浸泡2次，5min/次；

除去多余的液體后，置于95%乙醇中，浸泡5min；

除去多余的液體后，置于85%乙醇中，浸泡5min；

自來水沖洗3次, 3min/次。

4.2抗原修復：高壓鍋沸騰修復3min，自然冷卻，純化水浸泡2次， 3min/次；清洗液浸泡1次，3min/次。抗原修復時，修復液的量必須保證切片始終能浸泡在液體內。

4.3加過氧化物酶封閉劑

將抗原修復后的切片用純化水沖洗3次，3min/次，用油筆圈定玻片上的待測組織區域，清洗液沖洗1次，3min/次；

除去清洗液，在油筆圈定的區域內加過氧化物酶封閉劑（試劑量視切片大小，以完全覆蓋切片組織為宜），室溫下孵育5min；清洗液沖洗3次，3min/次。

4.4加抗體

除去清洗液，加入一抗（鼠抗）（試劑量視切片大小，以完全覆蓋切片組織為宜），室溫孵育60min； 清洗液沖洗3次，3min/次。

除去清洗液，加入一抗（兔抗）（試劑量視切片大小，以完全覆蓋切片組織為宜），室溫孵育60min； 清洗液沖洗3次，3min/次。

注：抗體的孵育順序可以調整，優先孵育定位細胞核的項目。

4.5加組合二抗

除去清洗液，加入組合二抗（試劑量視切片大小，以完全覆蓋切片組織為宜），室溫孵育30min；清洗液沖洗3次，3min/次。

4.6 快紅顯色

除去清洗液，加入新鮮配制的快紅染色液（試劑量視切片大小，以完全覆蓋切片組織為宜），室溫孵育5~10min, 純化水沖洗3次，3min/次。

4.7 DAB顯色

除去清洗液，加入新鮮配制的DAB染色液（試劑量視切片大小，以完全覆蓋切片組織為宜），室溫孵育5~10min, 純化水沖洗3次，3min/次。

4.8復染

加蘇木素（試劑量視切片大小，以完全覆蓋切片組織為宜）孵育3min，純化水沖洗返藍。

4.9 水性封片劑封片

在玻片上樣本區域滴加1滴水性封片劑進行封片，自然晾干或者65℃烤干，若需長期保存，干燥后再滴加中性樹膠進行封片處理即可。

4.10 閱片：將封片后組織切片放置光學顯微鏡下觀察結果。

5. 質量控制

5.1 陽性對照

陽性對照可作為正確組織準備和適當染色技術的指示。每次染色都要包含同一測試條件下的陽性對照片進行比較。已知的陽性組織對照只能用于監控步驟的正確執行和試劑的測試，并不用于幫助敘述病人樣本的明確診斷。如果陽性組織對照不能顯示適當的陽性染色，此批實驗測試樣本的結果應認為是無效的。

5.2 空白對照

每次染色都要包含同一測試條件下的空白對照試劑進行對比。空白對照試劑來代替抗體對組織切片進行染色，用來判斷非特異性著色，并對抗原部位特異性染色提供更好的解釋。

【參考區間】

該試劑盒為染色試劑，無特定參考區間。

【檢驗結果的解釋】

染色結果必須建立在陽性對照和空白對照實驗成立的基礎上：

陽性：顯棕色或紅色的位置為靶抗原部位；

陰性：無棕色或紅色染色為非靶抗原部位；

結果解釋應由資質的病理醫生來判斷。

【檢驗方法的局限性】

1.免疫組織化學病理診斷是一個多步的診斷過程，試劑選取、樣本固定、處理、切片準備及染色結果解釋等都必須經過嚴格的專業培訓；經過認證的實驗室和專業的操作人員將有助于實驗檢測過程的標準化，從而減少外界因素造成的染色偏差。

2.染色前組織的處理直接影響染色效果。不恰當的固定、冰凍、熔化、清洗、烘干、切片或被其他組織或液體污染都會造成假陽性、抗體定位不準確或假陰性結果。固定方法的不同或組織內部的不規則也可能造成異常的染色結果。

3.過度或不足的復染都會影響結果的正確解釋。

4.任何陽性染色或陰性染色缺失的臨床解釋都必須參考其臨床病史、細胞形態學和其他組織病理學背景進行評估。任何染色或其缺失的臨床解釋都必須以形態學研究和正確的對照及其他診斷試驗作為補充。測試結果及診斷價值也應由病理醫生結合臨床及其他檢查結果加以綜合分析和判斷。

5.由于腫瘤或其他病態組織中的抗原表達具有生物變異性，因此無法完全消除被測組織出現非預期反應的可能性。

6.假陽性的結果可能是由于蛋白或底物反應產物的非免疫學結合而造成的，也可能是紅血球和細胞色素C所造成。

【產品性能指標】

1. pH值：組合二抗和DAB緩沖液的pH值均為5~7.7。
2. 符合性

取陽性對照及陰性對照，并做空白對照，按照說明書規定進行免疫組織化學檢驗，陽性對照染色結果為陽性，陽性著色的定位應準確，無背景著色；空白對照和陰性對照染色結果為陰性。

3.批內重復性

同一組織來源的組織切片染色強度和定位無明顯差異。

4.批間重復性

不同批號試劑對同一組織來源的組織切片染色的強度和定位無明顯差異。

【注意事項】

1. 該試劑屬于體外診斷試劑，不做其他用途。
2. 實驗開始前，應仔細閱讀說明書。
3. 該試劑必須是經過嚴格培訓的專業人員在有效期內使用，如發現漏液、污染或變質，請勿使用。
4. 若將該試劑中組份和其他公司的產品混合使用，可能會出現染色異常情況。
5. 該試劑使用應采取適當的防護措施，避免試劑同皮膚和眼睛接觸，禁止口吸試劑，若皮膚、粘膜等身體部位接觸該試劑，及時使用大量水沖洗。
6. 每次染色過程中，必須同時使用陽性對照片和空白對照試劑，否則結果不可采用。
7. 抗原修復、孵育時間、溫度條件或應用其他方法均可能導致錯誤結果。
8. DAB有潛在致突變作用，在使用過程中應特別注意安全防護措施外，對其使用后的廢液存放和去毒性處理也應符合相關法律法規要求。

【標識的解釋】

符號	含義	符號	含義	符號	含義
	產品貨號		生產日期		儲存溫度
	產品批號		有效期		其他詳見說明書

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【參考文獻】

1.吳秉銓等《免疫組織化學病理診斷》.北京科學技術出版社，2007.3

2.國家食品藥品監督管理局《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》2014.9.11

【基本信息】

備案人/生產企業名稱：河南賽諾特生物技術有限公司

住所：鄭州高新技術產業開發區翠竹街1號109號

聯系方式：0371-56596916

售后服務單位名稱：河南賽諾特生物技術有限公司

聯系方式：0371-56596916

生產地址：鄭州高新技術產業開發區玉蘭街55號廠房F區

生產備案編號：豫鄭食藥監械生產備20140010號(更)

【醫療器械備案編號/產品技術要求編號】豫鄭械備20200105號

【說明書批準日期】2020年04月23日

【說明書修改日期】第一次修改：2020年07月01日；

第二次修改：2021年11月29日；

第三次修改：2024年12月31日。